EMBRIÓLOGO CLÍNICO
¿Alguna vez te has preguntado quiénes son los embriólogos clínicos o qué hacen todo el día en el laboratorio? El objetivo de este artículo es revisar brevemente las tareas y habilidades de los embriólogos clínicos en el laboratorio. Hablaré sobre la técnica que emplean, conocida como fecundación in vitro (FIV). Presentaré los procedimientos, métodos y equipos que utilizan en la FIV para seleccionar y emparejar los espermatozoides y óvulos calificados. Luego explicaré el proceso que siguen para crear embriones, preparar un ambiente adecuado para su crecimiento, transferir los mejores al cuerpo femenino y decidir qué hacer con el resto. Indicaré que controlar y mantener la calidad en el laboratorio es tan importante como otros procedimientos para los embriólogos. Sus decisiones y técnicas son fundamentales en cada etapa del procedimiento y requieren precisión.
UN BREVE INFORME DE SU TRABAJO EN EL LABORATORIO
Un laboratorio de FIV es la sección más importante en un centro de FIV porque es donde ocurren la mayoría de estos tratamientos. Por lo tanto, todo el equipo, los suministros, el entorno y el entorno deben estar listos para los procedimientos. Sin embargo, incluso cuando todo está listo, nada podría avanzar sin el arduo trabajo de personal de laboratorio altamente calificado y experimentado, que en este caso se llama embriólogos clínicos.Los embriólogos clínicos son científicos que pasan la mayor parte de su tiempo y energía en el laboratorio creando vida. Su objetivo principal es ayudar a los pacientes infértiles a lograr su sueño de tener bebés. Están ocupados todo el día en el laboratorio, empleando sus habilidades de micromanipulación, revisando incubadoras de dióxido de carbono (CO2), transfiriendo gametos y embriones de un medio de cultivo a otro con cuidado, realizando controles de calidad en detalle, etc. Justo después de recibir los espermatozoides y los ovocitos, los embriólogos hacen todo lo posible para que estén listos el uno para el otro. Hacen coincidir los espermatozoides y ovocitos calificados y los fusionan para crear embriones. Para hacerlo, siguen ciertos procedimientos y reglas meticulosamente.
RECOLECCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE OVOCITOS
Antes de que el médico comience la recuperación de ovocitos, los embriólogos se aseguran de que todo esté listo para la llegada del gameto. Todo debería parecerse casi al cuerpo de la madre. Por lo tanto, verifican la temperatura de la habitación, las incubadoras y las etapas del microscopio. También la luz de la habitación debe atenuarse en todo momento para los óvulos y embriones. Todos los medios de cultivo y platos se preparan para dar la bienvenida a los ovocitos. El médico aspira el líquido folicular y los ovocitos y entrega los aspirados y los enjuagues, en los tubos de ensayo, a los embriólogos. Bajo el microscopio, los embriólogos examinan inmediatamente el líquido y los buscan. Si los encuentran, los lavan inmediatamente y los transfieren al medio de fertilización que se ha preparado para ellos, y luego los transfieren a la incubadora para su posterior verificación y clasificación. Los ovocitos maduros se colocan en incubadoras durante 2-8 horas hasta la inseminación. Los ovocitos inmaduros necesitan más tiempo, alrededor de 24-35 horas, para madurar y prepararse para la inseminación (Jones, H., Jones, G., Hodgkin y Rosenwaks, 1986).La clasificación de los ovocitos depende de la forma en que serán inseminados. Si la inseminación convencional es el método de uso, se clasificarán tal como son, con cúmulos y corona radiata rodeándolos. Por lo general, los maduros se ven como un hermoso sol con claros rayos expandidos a su alrededor. Si el método de inseminación es la inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), el embriólogo debe examinar los ovocitos por sí mismos sin cúmulos o corona que los rodeen. Para hacerlo, primero limpian mecánicamente las células que rodean el ovocito con jeringas y luego durante unos segundos las despojan de una enzima que se llama hialuronidasa para completar la limpieza. La hialuronidasa es una enzima que generalmente es liberada por la cabeza del espermatozoide durante el proceso de fertilización, para disolver los ovocitos que rodean las células y permitir que se unan con los ovocitos.Ahora que el embriólogo tiene una visión clara de los ovocitos bajo el microscopio, puede calificarlos. Un ovocito de forma esférica, con un cuerpo polar unido a él, se llama maduro y está listo para la inseminación en 2-8 horas. El ovocito que tiene forma esférica, pero no cuerpo polar, se llamaría inmaduro y debe sentarse en la incubadora durante 24 horas para tener la oportunidad de madurar. Además, si el ovocito está roto, o no tiene forma esférica y cuerpo polar, se considera anormal y se descartaría.PREPARACIÓN Y CLASIFICACIÓN DE ESPERMATOZOIDES
La preparación de los espermatozoides generalmente es realizada por científicos clínicos que trabajan en la infertilidad masculina y se llaman andrólogos. Sin embargo, si no están disponibles, los embriólogos pueden cumplir el papel. Las muestras de semen se procesan con una técnica para separar los espermatozoides de las células y los escombros. Por lo general, la aspiración de espermatozoides se llevaría a cabo por un médico si la pareja masculina no puede eyacular o si hay espermatozoides raros o nulos en la eyaculación. Los embriólogos verifican la calidad y cantidad de esperma y deciden si son adecuados para la fertilización o no. Revisan la morfología de los espermatozoides para ver si hay una apariencia física normal o anormal, motilidad, concentración y velocidad de su natación. Si la cantidad y calidad de los espermatozoides son normales, se considerarían para la inseminación convencional. De lo contrario, los espermatozoides se inyectarían directamente en los ovocitos porque no son capaces de penetrar en los ovocitos por sí mismos.
FERTILIZACIÓN
Si el esperma es de buena calidad y cantidad se utilizará para la inseminación convencional; de lo contrario, se realizaría ICSI. La inseminación convencional significa incubar ovocitos maduros con espermatozoides calificados. Speroff y Fritz (2005) sugieren que ‘‘En general, cada ovocito se incuba con 50-100 mil espermatozoides móviles’’ (p. 1234), para obtener el resultado deseado. Por lo tanto, los embriólogos incuban cada ovocito con esta cantidad de espermatozoides, en un plato con medio de fertilización, durante aproximadamente 12-18 horas. Durante este tiempo, la fertilización puede ocurrir cuando un espermatozoide penetra en el ovocito y se fusionan.La ICSI se realizaría si la cantidad de espermatozoides es baja. El procedimiento ICSI es muy efectivo en la FIV, Gardner, Weissman, Howles y Shoham (2004) informan que ‘‘La capacidad de ICSI para lograr mayores tasas de fertilización y embarazo independientemente de la característica del esperma lo convierte en el procedimiento de manipulación más poderoso hasta ahora con el que tratar la infertilidad por factor masculino’’ (p. 171). Los embriólogos recogen un espermatozoide; inmovilizarlo, atrayéndolo primero en la cola de la pipeta para que la cabeza se pueda insertar primero en el ovocito. El ovocito debe estabilizarse en el otro lado para que el cuerpo polar esté en la posición de las 12 o 6 en punto. Luego, el embriólogo inyecta la cabeza del esperma en posición de las 3 en punto dentro del ovocito. Después de la inyección, estos ovocitos también deben colocarse en incubadoras durante 12-18 horas.Después de 18 horas, los embriólogos los revisan para ver si se ha producido la fertilización. El resultado de la fertilización es una célula que se llama cigoto. En este punto, es necesario examinar el estado pronuclear del cigoto. El cigoto que fue creado por la inseminación convencional está cubierto por una capa de células corona y deben eliminarse para visualizar el ovocito para su clasificación. Sin embargo, el cigoto que es el resultado de ICSI ya está limpio. Si el cigoto es normal, los embriólogos pueden ver dos pronúcleos dentro de él y dos cuerpos polares en la superficie.Los dos pronúcleos generalmente se llaman 2PN. Los embriólogos siempre están examinando cuidadosamente los pronúcleos, y si ven 3PNs, saben que el cigoto no es normal y lo descartan (Jones et al., 1986). El proceso de fertilización suele durar 24 horas y termina con la primera escisión. El cigoto ahora se llama embrión se llama embrión.
CULTIVO Y CLASIFICACIÓN DE EMBRIONES
Los embriólogos se aseguran de que todo esté listo para el cultivo de embriones. Preparan el entorno para que los embriones sientan que se están escindiendo en el cuerpo de su madre. El medio y su pH, el tamaño del grupo embrionario, el oxígeno y el dióxido de carbono son importantes en el cultivo de embriones (Gander et al., 2004). Normalmente, los embriones se escinden y alcanzan la etapa de 2 células dentro de las 25-27 horas (día uno) después de la inseminación o ICSI. En 48 horas (día 2) alcanzan la etapa de 4-6 células, en 72 horas (día 3) 8 o más etapa celular, en el día 4 de la mórula y el día 5 de blastocisto.El sistema de clasificación para el día 1-3 podría ser diferente entre los diferentes centros de FIV, pero el punto principal es considerar el número de blastómeros o células cada día, el tamaño de los blastómeros y el grado de fragmentación citoplasmática. Incluso los blastómeros de tamaño uniforme y la fragmentación mínima significan que la calidad de los embriones es mejor. Esta clasificación es especialmente importante si la transferencia de embriones tiene lugar el día 3. Los embriólogos observan y examinan cada embrión con mucho cuidado todos los días para que puedan elegir los embriones mejor calificados para transferir al paciente.Si la transferencia no ocurre el día 3, entonces continúa hasta el día 5 cuando los embriones se convierten en blastocistos. En general, los blastocistos obtienen su clasificación de acuerdo con su grado de expansión, estado de eclosión, desarrollo de masa celular interna (ICM) y su formación de trofoectodermo. Un blastocisto completo con ICM apretada y trofoectodermo formando epitelio cohesivo con muchas células sanas generalmente se consideraría un buen candidato para la transferencia (Veeck y Zaninovic, 2003, p.104).TRANSFERENCIA DE EMBRIONES
El día de la transferencia, el embriólogo elige el embrión o embriones mejor calificados para el paciente designado. Cuando la paciente está en la posición correcta, el embriólogo aspira los embriones en el catéter y se los entrega al médico para transferirlos al útero. Cuando se completa el procedimiento de transferencia, el médico devuelve el catéter al embriólogo para que lo enjuague y examine el material. De esta manera, se aseguran de que el embrión (s) se haya transferido con éxito o no. Si, por casualidad, algún embrión regresa en el catéter, repetirán el procedimiento una y otra vez.
CRIOPRESERVACIÓN Y DESCONGELACIÓN
La criopreservación o congelación y descongelación o descongelación de gametos (óvulos y espermatozoides), cigoto y embriones permite más posibilidades de embarazo a partir de una cosecha de óvulos. La mayoría de las veces los pacientes terminan con exceso de embriones y los embriólogos sugieren criopreservación. La congelación de embriones da a los pacientes la oportunidad de decidir si quieren usarlos en el futuro. Algunos centros congelan los extras cuando son cigotos con 2PN y algunos se congelan en la etapa de blastocisto. Sin embargo, Gardner et al., (2004) Los embriones se congelan bien y se implantan a tasas aceptables después del deshielo y la transferencia. Casi cualquier espécimen en etapa de escisión se puede congelar con éxito, desde 2 células hasta blastocisto. La congelación del embrión es bastante conveniente porque no hay consideraciones de tiempo urgentes" (p.270). La congelación de espermatozoides suele ser el trabajo de los andrólogos y congelan el semen, que es el líquido reproductivo masculino que contiene esperma. La congelación de ovocitos podría ser de gran ayuda para muchos que tienen problemas con la congelación de embriones. Sin embargo, la congelación de ovocitos no ha sido fácil debido a la característica biológica única de los ovocitos. Recientemente, una nueva técnica, que se llama vitrificación, ha demostrado ser prometedora para la congelación de ovocitos. En algunos centros de FIV los embriólogos han comenzado a utilizar esta técnica con resultados justos se necesitan más estudios para optimizar la técnica (Gardner et al., 2004).PRUEBAS GENÉTICAS PREIMPLANTACIONALES
Las pruebas genéticas preimplantacionales (PGT) se refieren a procedimientos que podrían evaluar ovocitos o embriones antes de la implantación. Ayuda a muchas parejas que están en riesgo de tener hijos con anomalías genéticas hereditarias. También revela el sexo de los embriones. Si las parejas están interesadas, los embriólogos pueden extraer una o más células de los embriones para su posterior evaluación. El procedimiento es muy sensible y Los embriólogos deben estar altamente capacitados en micromanipulación para poder extraer la célula sin causar daño al embrión. La célula sería analizada cromosómicamente y los resultados reportados a los embriólogos. Si los embriones son anormales, los embriólogos notifican a las parejas y pueden elegir si los descartan o no.CONTROL DE CALIDAD
Una de las tareas más importantes de los embriólogos es controlar y mantener la calidad del laboratorio de embriología. Según Cutting, Pritchard, Clarke y Martin para mantener un alto nivel de práctica en los laboratorios de FIV, los embriólogos necesitan establecer un sistema de control de calidad (2004). Por ejemplo, todos los equipos deben ser revisados y recibir mantenimiento regularmente. Las campanas deben limpiarse de forma rutinaria y la temperatura de las incubadoras, el dióxido de carbono, el nivel de la bandeja de agua y su alarma deben configurarse y verificarse. Según Mayer et al. (2003) "Un ejemplo de control de calidad común es la documentación de la temperatura del refrigerador en una tabla diaria. Estas mediciones se comparan con un rango de límites aceptables que se habían definido previamente" (Sección de introducción, párrafo 1). Todos los materiales deben estar libres de toxicidad, por lo tanto, los embriólogos los prueban todos antes de usarlos. La mayoría de los laboratorios utilizan "Mouse Assay" para verificar la calidad de los materiales. La mayoría de los materiales que están en contacto con gametos y embriones humanos como soluciones, platos de cultivo, catéteres y similares se prueban. Los embriones de ratón de dos células se cultivan en estos artículos, de la misma manera que los embriones humanos, y se monitorean los resultados. Los embriólogos observan para asegurarse de que los embriones de ratón crezcan desde la etapa de dos células hasta la etapa de blastocisto eclosionado. Si un cierto número de embriones de ratón no alcanza la etapa de blastocisto, el elemento falla. En este caso aquellos materiales que no superen la prueba serán devueltos a su empresa.CONCLUSIÓN
Muchos pacientes infértiles de todo el mundo se encuentran en los centros de FIV con la esperanza de que sus sueños de tener bebés se hagan realidad. La parte fundamental de cualquier centro de FIV es el departamento de embriología donde trabajan los embriólogos clínicos. Los embriólogos clínicos son científicos diligentes que utilizan sus habilidades para cumplir con sus tareas sensibles. Sus tareas consisten en la recolección de óvulos, preparación de espermatozoides, clasificación de gametos y embriones, fertilización, cultivo de embriones, transferencia de embriones, congelación y descongelación de gametos y embriones, DGP y control de calidad. Necesitan seguir los procedimientos paso a paso con precisión. Cada paso es un reto y necesita embriólogos altamente cualificados para conseguir resultados satisfactorios.REFERENCIAS
1.Cutting, R. C., Pritchard, J., Clarke, H. S., & Martin, K. L. (2004). Establishing quality control in the new IVF laboratory. Human Fertility, 7(2): 119-125.2.Gardner, D. K., Weissman, A., Howles, C. M., & Shoham, Z. (Eds.). (2004). Textbook of assisted reproductive techniques: Laboratory and clinical perspectives (2th ed.). Landon, New York: Taylor & Francis.3.Jones, H. W., Jr., Jones, G. S., Hodgkin, G. D., Rosenwaks, Z. (Eds.). (1986). In vitro fertilization. Norfolk: Williams & Wilkins.4.Mayer, J.F., Jones, E.L., Lacy, D.D., Nehchiri, F., Muasher, S. J., Gibbons, W. E., & Oehniger, S. C. (2003). Total quality improvement in the IVF laboratory: Choosing indicators of quality. Reproductive BioMedicine Online, 7 (6), 695-699. Retrieved from http://www.rbmonline.com/article5.Speroff, L., Fritz, M. A. (2005). Clinical gynecologic endocrinology and infertility (7th ed.). Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins.6.Veeck, L. L., Zaninovic, N. (2003). An atlas of human blastocysts. New York, London: The Parthenon Publishing Group.Dr. Azita Hengameh Nazari
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